细胞冻存和复苏原则及程序

一、冻存和复苏的原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。二、标准程序当温度在-25℃以上时，1～2℃/min当温度达-25℃以下时，5～10℃/min，当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中三、简易程序将冻存管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱...

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ELISA操作之标本的采取和保存、保温

一、标本的采取和保存大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，HRP为标记的ELISA测定中，以溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均...

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单克隆抗体的应用　

单克隆抗体问世以来，由于其*的特征已迅速应用于医学很多领域。主要表现在以下几个方面。1．检验医学诊断试剂作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：①病原微生物抗原、抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子的测定。单克隆抗体对抗...

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玻璃仪器清洗规程

1、试管、烧杯、漏斗等玻璃仪器如无特殊要求，用洗衣粉刷洗内壁，自来水冲净后，纯净水润洗三次，以内壁不挂水珠为准，自然晾干。有效期为七日，过期后使用时重新洗涤。2、液相色谱、气相色谱使用的进样瓶洗涤方法和原则与滴定管相同。3、效价用双碟用完后，先浸入来苏水中24h，取出超声20分钟，自来水逐个冲净，纯净水润洗后，以碟上不挂水珠为准自然晾干，装入桶内。160℃干烤2小时灭菌备用。有效期为七日，过期后使用时重新160℃干烤2小时即可。4、微生物限度测定用三角瓶、刻度吸管、试管、双碟...

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抗体的基因重排

抗体的L链是由C、V、J三个基因簇编码的，H链由C、V、D、J四个基因簇编码的。是编码可变区，300个种类；编码高变区,有15～20个种类；编码连接V、V有DJC的结合区，4～5个种类；编码恒定区，有C仅有一种。这些外显子通过多种多样的重排，所合成出的肽链，还要再进一步进行L和H链组合，这样zui后生成的抗体种类就非常多了。抗体基因重排是发生在淋巴细胞分化的时候。按理化性质和生物学功能，可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。1、IgM抗体是免疫应答中首先分泌的...

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常用的几种抗原修复方法

1、微波炉加热在微波炉里加热0.01枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5-10分钟，反复1-2次。2、高压热修复在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01m枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）.盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。（骨及软骨组织的标本选择较温和的微波加热...

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血清的灭活与分装

一、化冻将血清（FetalBovineSerum，Hyclone）从－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化冻过夜；也可室温（或浸于自来水中）化冻，化冻后若不马上灭活，可以放入4℃冰箱暂时保存；二、灭活1、放入室温的水浴锅内开始加热（同时放入一个内装200ml自来水的血清瓶，插入一根温度计，温度监控以此为准）；2、当温度计显示56℃时，控制在此温度30分钟±3分钟；若不小心使温度上升超过56℃，则：若仍未超过60℃，且时间很短（比如：不超过5分钟），则仍可使用；若超过6...

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ES细胞的冻存操作

1、常规方法将细胞消化成单细胞悬液；2、转入试管，1000转/分钟离心5分钟；3、配适量冻存液（为含10%二甲亚砜（DMSO），10%FBS的DMEM培养液）；4、弃上清，每管加入1ml冻存液，吹打成细胞悬液（只要使ES细胞分散成3—5个细胞的小团块即可），转入冻存管，作好标签；5.放入程序冻存盒内24小时后转入液氮罐中冻存。相关产品信息：冻存管,冻存盒,管鼓盖,加样槽,PCR板,PCR管架,Sigma现货,Abcam抗体,GE试剂,Amresco试剂

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